血细胞分析仪的使用及质量控制

南京中央路艾贝尔宠物医院  马庆博

目前自动血液细胞分析仪在医院的使用已相当普及，无论是使用二分类或三分类，还是使用更高级的五分类的血细胞分析仪。血液细胞分析仪可在很短时间内计数细胞，克服了手工法计数的固有误差，有测定参数多、分析速度快、结果准确、重复性好、性能相对稳定等特点，为疾病的诊断、治疗及预后分析提供重要依据。

BC-2800 Vet型全自动血细胞分析仪器(深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司生产)，属于当前使用较多的三分类分析仪。其白细胞计数原理是在白细胞计数室中加入溶血剂使红细胞破碎成不被仪器计数小孔识别的碎片，采用电阻抗法以达到单独计数的目的。而对白细胞的分类是通过溶血剂处理后各种白细胞体积（采用电阻抗法）的大小来区分的。其红细胞计数原理和血小板的计数原理是一样的，采用电阻抗法记录脉冲的个数与幅度， 根据设置好的阈值进行红细胞和血小板的计数。本机没有浮动界标功能，而血小板本身易凝集，故本机对血小板计数结果不够准确，波动大，重复性差。

电阻法原理：检测单元有一小的开口，即检测小孔，小孔两侧有一对正负电极，稀释样本中的血细胞（具有不良导体特性）在负压作用下通过检测小孔的时候，电极间的电阻会发生变化，从而在电极两端形成一个同细胞体积大小成比例的脉冲。脉冲的个数与通过小孔的细胞数相同，幅度与细胞的体积成正比。详见BC-2800 Vet型全自动血细胞分析仪器使用说明书。

根据其工作原理，血细胞分析仪测的结果的准确性主要在于血细胞的稳定性。其主要影响因素有采血，微量血样本的采集，预稀释样本的放置时间，操作仪器过程及仪器自身因素，疾病因素，综述如下：

1.采血因素

采血过程中因操作缓慢，压脉带扎紧时间长，穿刺不顺，组织液混入，等均可促成血小

板聚集，导致计数结果偏低。据报道[1]，体位改变后抽血，从卧位到坐位PLT计数指标均数偏差百分数11.7%~12.2%之间。所以采血一定要快，静脉采血，采血部位不可过度挤压，以免血液中混入大量的组织液，且一针见血。

2.预稀释标本的制作

血样采集后应及时制作预稀释标本，现医院多采用移液枪采集血样，血液粘稠吸附力强，移液时应尽量水平放置采血针软管，移液枪吸取血液时要缓慢，打出时要快，为保护移液枪应避免多次重复吹打混匀液体。

附移液枪使用及注意事项：

1) 设定移液体积

从大量程调节至小量程为正常调节方法，逆时针旋转刻度即可，从小量程调节至大量程

时，应先调至超过设定体积刻度，再回调至设定体积，这样可以保证移液器的精确度。
    2) 装配移液枪头
    将移液枪垂直插入吸头，左右旋转半圈，上紧即可。用移液器撞击吸头的方法是非常不可取的，长期这样操作回导致移液器的零件因撞击而松散，严重会导致调节刻度的旋钮卡住。
    3) 吸液及放液
    移液之前，要保证移液器、枪头和液体处于相同温度。在吸液之前，可以先吸放几次液体以润湿吸液嘴（尤其是要吸取粘稠或密度与水不同的液体时）。吸头尖端浸入液面3mm以下，吸液前枪头先在液体中预润洗，慢吸慢放，浓度和粘度大的液体应慢吸快放，放液时如果量很小则应吸头尖端靠容器内壁。
    4) 吸有液体的移液枪不应平放，枪头内的液体很容易污染枪内部而可能导致枪的弹簧生锈。
    5) 移液枪在每次使用后应将刻度调至最大，让弹簧回复原型以延长移液枪的使用寿命。 
    6）吸取液体时一定要缓慢平稳地松开拇指，绝不允许突然松开，以防将溶液吸入过快而冲入取液器内腐蚀柱塞而造成漏气。
    7）为获得较高的精度，吸头需预先吸取一次样品溶液，然后再正式移液，因为吸取血清蛋白质溶液或有机溶剂时，吸头内壁会残留一层”液膜”，造成排液量偏小而产生误差。
    8）浓度和粘度大的液体，会产生误差，为消除其误差的补偿量，可由试验确定，补偿量可用调节旋钮改变读数窗的读数来进行设定。
    9）移液器严禁吸取有强挥发性、强腐蚀性的液体（如浓酸、浓碱、有机物等）。
    10）严禁使用移液器吹打混匀液体。
    11）不要用大量程的移液器移取小体积的液体，以免影响准确度。

3.预稀释样本的放置时间

林室顺等［2］实验报道，预稀释标本制作完成后，立即检测(3 min以内)，使易黏附、聚集的PLT在稀释液中，短时间内不能完全自由解离、分散，PLT具有易粘附的特性，聚集的PLT在血细胞稀释液中因PLT表面带负电荷，因分子（离子）的相互作用或其他因素，使聚集的PLT逐渐解离。由于标本预稀释液用量少，不利于聚集的PLT解离，短时间内测试时，聚集的PLT未完全解聚，仪器将聚集的PLT误诊为WBC，使PLT结果降低(直方图会出现锯齿波或尾部抬高)，WBC计数相对升高；预稀释标本放置时间过长的WBC脆性增大，容易造成溶血过度，使部分WBC因受溶血素破坏而结果偏低。WBC分类计数中过度溶血的部分WBC膜受损，细胞体积缩小甚至形成裸核，使相对体积较大的WBC （如单核细胞、中性细胞）减少，而相对体积较小的WBC（如淋巴细胞）增多。血液标本放置时间过长，会产生大量破碎的红细胞碎片，而使PLT数量明显升高。因此采血后放置20 min内检测结果较好且稳定[3]，故严格控制测定时间在3 min～20 min之间。

4.操作仪器过程及仪器自身因素

样本杯应干净，取稀释液时样本杯内壁应与采样针头接触，使稀释液沿管壁流入样本杯中，避免产生气泡或溅出，采样针头上的最后一滴稀释液应采下。

大部分细胞分析仪(包括BC-2800 Vet型全自动血细胞分析仪器)采用电阻法，没有浮动界标功能，它不能识别小红细胞，红细胞碎片,血小板聚集等。因此，存在小红细胞时，仪器计数值高于样品的实际值，血小板聚集时，仪器计数值又小于样品实际值，血小板直方图都呈异常特征性改变。遇到此情况应用手工法计数。

仪器的保养，各种试剂的更换，每日开机关机的维护应有专人负责。

5.疾病因素

有些疾病，如糖尿病、心血管病中，由于血小板自身活化程度较高，易于聚集，甚至在体内就已形成微聚集状态，这也能导致血小板计数结果假性减少［4］。弥散性血管内凝血患者的血小板计数仪器法明显高于手工法［5］。分析其原因，是由于病人血管内溶血产生的红细胞碎片对仪器法计数血小板所造成的正向干扰引起的。高血镁也能引起抗凝静脉血血小板计数结果假性降低［6］。

综上所述，自动血液分析仪血细胞计数的干扰原因是多方面的，这些因素中有仪器自身原因，以及一些人为的因素所致，有些可以通过仪器校正、室内质检和重视结果的综合分析来消除干扰。随着技术发展，更先进仪器投入使用，可以使血细胞计数准确无误，为疾病的诊断、治疗及预后分析提供更好更准确的依据。

参考文献

李素珍，林福禧，樊锦秀，等.体位改变对血细胞参数测定的影响［J］.上海医学检验杂志,2002,17（6）：369

吕斌斌. 预稀释标本放置时间对血细胞分析仪测定结果的影响[J].临床检验杂志, 1997,15(1):32.

徐贵全.血标本稀释后存放时间对血小板参数测定的影响[J].上海医学检验杂志, 1999,14(4):200.

王笔金、王琳.自动血液细胞分析仪血小板计数的干扰因素初析［J］.现代检验医学杂志,2002,17（4）：95

贾得志.弥散性血管内凝血患者应使用手工法计数血小板［J］.临床检验杂志,2003,21（4）：228

邱烨.高血镁引起抗凝静脉血小板计数结果假性降低及纠正方法［J］.临床检验杂志，2002，20（4）：232